發(fā)布時間： 2020-10-26 點(diǎn)擊次數(shù)： 3095次
PCR儀的PCR即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是指在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點(diǎn)，通過變性、退火、延伸等步驟，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過程。是一項DNA體外合成放大技術(shù)，能快速特異地在體外擴(kuò)增任何目的DNA。可用于基因分離克隆，序列分析，基因表達(dá)調(diào)控，基因多態(tài)性研究等許多方面。
梯度溫度控制是幫助用戶進(jìn)行PCR優(yōu)化實(shí)驗的特性之一，以便確定PCR實(shí)驗方案的佳溫度和保持時間，盡量減少實(shí)驗次數(shù)。在理論上，真正的梯度應(yīng)在均勻的金屬加熱模塊上顯示線性溫度斜率。
然而，傳統(tǒng)梯度PCR儀通常只采用單一的熱模塊并通過位于兩端的兩個加熱及冷卻元件進(jìn)行溫度的控制。該設(shè)計經(jīng)常會導(dǎo)致以下限制：
1.僅能設(shè)置兩個溫度：在熱模塊的兩端設(shè)置引物退火的高、低極限溫度。因此，無法在模塊間實(shí)現(xiàn)其他區(qū)域溫度的準(zhǔn)確設(shè)置。
2.由于不同列之間的熱學(xué)相互作用，模塊上不同區(qū)域之間的溫度更可能遵循的是S形的曲線變化而非真正的線性梯度。
新型梯度PCR儀可實(shí)現(xiàn)更好的引物退火溫度控制。該技術(shù)的一種形式便是設(shè)計帶有三個或更多分割金屬模塊的PCR儀，每一模塊都具有獨(dú)立的加熱和冷卻元件。選擇能夠準(zhǔn)確進(jìn)行梯度溫度控制的PCR儀將大大節(jié)省優(yōu)化所需時間，找到佳的退火溫度和時間，并確保在梯度模式下優(yōu)化的條件在正常模式下也能獲得相同的結(jié)果。
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